1986年，參演首部《難忘的中學時光》。1988年，主演《瘋狂的代價》，獲得第十一屆大眾電影百花獎和第八屆中國電影金雞獎最佳女主角提名。
1990年，參演張豐毅主演的電影《龍年警官》，獲得第十三屆大眾電影百花獎最佳女配角獎。
1991年，參演首部電視劇《雪山飛狐》，一人同時飾袁紫衣和銀姑兩個角色
1992年，與斯琴高娃共同主演獲得四十三屆柏林電影節大獎“金熊獎”的影片《香魂女》。
1994年，參演王志文、許晴主演的電視劇《東邊日出西邊雨》，飾演陳丹妮。
1997年，伍宇娟自編自導影片《山茶花開》，因為用人不當，折騰到最后，劇組只剩下她一個人，還欠下一大筆錢，為了還錢，從不拍電視劇的她開始涉足電視圈。
2002年5月，參演姜文主演的電影《尋槍》，飾演韓小蕓。
2003年，參演講述白衣天使與醫院抗擊非典的一線醫護人員的電視劇《沒有硝煙的戰場》，出演英雄天使葉欣。
2004年，參演電視劇而在《紅莓花兒開》中，伍宇娟扮演了夏太平的妻子花月風，一個脾氣暴躁甚至有些神經質的女人。
2005年10月，與劉威主演的電影《愛亦無聲》上映，飾演盲女郝梅；主演電視劇《用我的生命去愛你》，在劇中飾演“媽媽”薛芙蓉。
2020年7月，出演脫貧攻堅題材電視劇《江山如此多嬌》。
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