1982年，王伯昭出演人生中第一部影片《筆中情》，因在劇中有不錯的表現，該電影也成為王伯昭的成名作。在這部以年輕書法家的愛情為題材的古裝片里，王伯昭扮演的書法家趙旭之的名字分別取自三位歷史上著名書法家的姓名：趙孟頫、張旭、王羲之 ??。
1984年，王伯昭與演員六小齡童、馬德華合作出演了經典電視劇《西游記》，因在劇中飾演白龍馬人型被大多數觀眾所認識 ??。同年，與演員高維明、謝芳分別合作出演電影《一個女人的命運》、《清水灣，淡水灣》，在劇中飾演黃立秋和小張。
1986年，王伯昭接連出演電影《俠女十三妹》、《文成公主》和電視劇《不知其名》，并在劇中有不錯表現。
1991年，王伯昭與李安導演合作，出演電影《推手》，該劇圍繞一個移民美國家庭發生的一系列故事，表現了傳統的中國文化與美國的風土人情之間的沖突 ??。
1994年，王伯昭與演員林俊賢合作出演古裝電視劇《唐太宗李世民》，在劇中飾演李建成。
1997年，王伯昭與 張國立，陳亞蘭，蘇有朋，陳志朋等多位演員合作主演古裝愛情電視劇《一品夫人芝麻官》。
1999年，王伯昭出演電視劇《春光燦爛豬八戒》，在劇中飾演玉皇大帝 ??。同年6月，與張晨光、于佳卉合作出演電視劇《王寶釧與薛平貴》，在劇中飾演蓋世文。
2002年，王伯昭在由張恨水同名小說改編的民國愛情劇《金粉世家》飾演白雄起。該劇講述了十九世紀二十年代，北洋軍閥內閣總理之子金燕西和清貧女子冷清秋之間的愛情故事。 ??。
2004年，王伯昭與演員張衛健、謝霆鋒合作出演古裝電視劇《小魚兒與花無缺》，在劇中飾演江別鶴。
2005年，由《金粉世家》原創班底打造的電視劇《金色年華》開播，王伯昭與吳競、黃梅瑩、舒耀瑄等演員合作，在劇中飾演許洪均 ??。
2006年，王伯昭參演電視劇《局中局》，劇中扮演方立新。 ??。
2010年，王伯昭與演員陳浩民、寇振海合作出演電視劇《秦香蓮》，在劇中飾演陳恂 ??。
2011年，3月22日，在央視一套播出的電視劇《東方》， ??飾演錢學森。 ??王伯昭在《命運交響曲》中飾演宋承昊（遲帥飾）的父親宋禮源，劇中二人將上演多場“劍拔弩張”的對手戲，此次是王伯昭與遲帥繼《新京城四少》后，再次合作扮演父子 ??。
2012年，王伯昭與沈星浩、李寶能導演合作，出演電視劇《同在屋檐下》，劇中飾演洛銘 ??。同年，與李璟、李東恒等青年偶像演員合作出演電視劇《鐵血男兒夏明翰》，劇中飾演章府老爺章炎，面對章承基、章妙菱（蘇青飾）一雙兒女皆被夏明翰攪的反目成仇，疼惜憐憫與恨鐵不成鋼的矛盾心理讓他一次次陷入不仁不義 ??。
2013年，王伯昭參演由導演馬功偉執導電視劇《更年期的戰爭》，該劇講述了一位從海外留學歸來的青年才俊任何與女強人母親之間的情感碰撞和摩擦。
2014年，紀念鄧小平誕辰110周年的電視劇《歷史轉折中的鄧小平》在央視一套開播。該劇講述1976年-1984年這段重要歷史時期。王伯昭在劇中飾演榮毅仁 ??。
2020年12月20日，參演的電視劇《大江大河2》播出，在劇中飾演李耘寧。
2021年8月27日，主演情感勵志電影《誤入青春》上映 ??；11月6日，友情客串的年代劇《鑄匠》在中央電視臺CCTV-8頻道經典劇場全國首播 ??；參演電視劇《星辰大海》。
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