1973年，曹翠芬離開了稻田，走進了北京電影制片廠，并參演了個人首部電影《南征北戰》 。
1976年，與胡靜、李百萬聯合出演劇情電影《牛角石》。1977年，由其參演的動作劇《黑三角》播出。1979年，與陳佩斯、陳強聯合出演家庭情感劇《瞧這一家子》，在片中飾演深愛兒子的善良母親 。
1980年，與李羚等聯袂主演兒童電影《苗苗》。1981年，參演的兒童電影《風帆》上映。1984年，由其出演的劇情電影《生財有道》上映；同年，與李連義共同主演劇情電影《跳動的火焰》。1986年，參演由馬秉煜執導的劇情電影《你的微笑》。
1987年，與沈丹萍、馬崇樂聯合出演劇情電影《女人國的污染報告》。1990年，與鞏俐、何賽飛聯袂出演劇情電影《大紅燈籠高高掛》，在片中飾演表面對人溫柔熱情，暗地里卻是陰險狡詐的第二房太太卓云 ，她憑借該片獲得第4屆中國電影表演藝術學會金鳳凰獎表演學會獎。
1992年，與郭少雄合作主演劇情電影《雜嘴子》，在片中飾演民生的媽媽淑英 ，她憑借該片獲得第6屆中國電影童牛獎優秀成人獎 。1993年，由其出演的家庭劇《上海一家人》上映 ，她憑借該劇獲得第12屆中國電視劇飛天獎最佳女配角獎 。1995年，與高強合作主演劇情電影《孤兒淚》，在片中飾演善良的地道農婦耿二女 ，她憑借該片入圍第16屆中國電影金雞獎最佳女主角獎 ，獲得第2屆中國電影華表獎最佳女主角獎。
1998年，由其參演的古裝劇《穆桂英大破天門陣》播出；同年，參演古裝劇《穆桂英十二寡婦征西》 ；此外， 還與吳冕、廖京生聯合出演了家庭劇《薔薇雨》。1999年，出演由霍建起執導的劇情電影《九九艷陽天》。2000年，與朱琳搭檔主演劇情電影《黑色風景里的女人》。
2002年，出演由謝鳴曉執導的家庭倫理劇《平安是?！?。2004年，由其出演的家庭都市劇《深度誘惑》播出 ；同年，與郭冬臨、嚴曉頻聯袂主演家庭劇《女人不麻煩》，在劇中飾演有五個孩子的婦科醫生樊淑芳 。2005年，與蔣勤勤、張靜初聯袂出演驚悚電影《七夜》 ；同年，參演由董志強執導的諜戰劇《密令1949》；此外，還主演了愛情家庭電影《追趕我可能丟了的愛情》，在片中飾演俏生活潑，容光換發的秧歌隊員石若玉。
2006年，出演由姚曉峰執導的情感劇《夜深沉》，該劇根據張恨水的同名小說改編 ；3月27日，與魯園等共同出演的家庭情感劇《守望幸福》首播；同年，與黃覺合作主演家庭劇《甜蜜的煩惱》，在劇中飾演疼愛兒子的老太太陳玉英。2007年2月1日，由其參演的都市情感劇《廖家》播出。
2009年，出演以發生在沂蒙老區的孟良崮戰役為背景的劇情電影《戰爭中的女人-沂蒙六姐妹》，她憑借該片入圍第10屆中國長春電影節最佳女配角獎 、第27屆中國電影金雞獎最佳女配角獎 ；3月17日，與高曙光、王姬聯合出演的家庭倫理劇《老伴》播出，在劇中飾演思路敏捷、充滿沖勁的普通小學老師林芝花 ；11月16日，與海清、張嘉譯聯袂出演都市愛情劇《蝸居》 。
2010年，與張國立等共同出演愛情劇《不如跳舞》。
2011年，與蔣雯麗、孫淳聯袂主演愛情家庭劇《幸福來敲門》，在片中飾演善良卻很傳統的老人錢淑華 ；同年，由其出演的都市情感劇《愛你所以離開你》播出；11月8日，由其參演的愛情電影《失戀33天》上映；此外，還參演了愛情劇《婚姻密碼》。
2012年，與詠梅、陳剛聯合主演當代都市劇《兒女的戰爭》，在劇中飾演劉家后媽張長蘭 。
2013年，出演由陳偉祥執導的家庭劇《那金花和她的女婿》 。
2014年，與史蘭芽等共同主演現代劇《國家審計》 。
2017年，由其參演的醫療劇《外科風云》播出。
2018年，與趙麗穎、馮紹峰聯合出演古裝劇《知否知否應是綠肥紅瘦》，在劇中飾演剛正不阿，是非分明的盛老太太，該劇改編自關心則亂同名小說 ；同年，與吳鎮宇、董璇等聯袂出演當代都市劇《慢慢地陪著你走》 。
2019年，出演電視劇《慶余年》，飾演范老太太 。
2020年6月，參演的電視劇《最美的鄉村》播出 ；同年，主演家庭都市劇《嗨，什剎?！?；9月，入圍第七屆中國電視好演員獎紅組女演員名單 。10月20日，由中國視協演員工作委員會主辦的第七屆“中國電視好演員”網絡投票結果公布，曹翠芬獲得中國電視好演員優秀演員（紅組女演員）。
2021年9月26日，參演的電視劇《熟年》宣布開機 ；10月18日，特別主演的古裝愛情勵志劇《嘉南傳》在騰訊視頻播出 。
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