1986年，楊新鳴出演了個人首部電影《野山》，從而步入影視圈。該片獲得第六屆中國電影金雞獎最佳故事片獎，楊新鳴在片中飾演農民阿承。1993年，楊新鳴和嚴順開合作，在春節聯歡晚會上表演小品《張三其人》，小品反映了當時的一些底層人物生活百態，獲得了良好的口碑。此后，楊新鳴參演了多部小品。1994年，主演劇情電影《綁架童心》，和雷漢、宮傲合作，在片中飾演父親。1996年，楊新鳴和李丁、劉淑萍等人合作，二度登上央視春節聯歡晚會。表演了小品《一個錢包》，扮演了一位陜西游客。
1999年，楊新鳴和仲星火、梁麗等人合作，出演了由萬盛華執導的電視劇《九九臘月紅》，該劇獲得天馬獎優秀電視劇一等獎。2001年，楊新鳴首度出演話劇，和魏清芬主演紀實話劇《命斷贛江》，該劇取材于原江西省副省長胡長清受賄案，楊新鳴飾演男主角胡長清，并憑借該劇獲得陜西省第三屆藝術節表演一等獎。2005年，楊新鳴主演由王小琮執導的話劇《郭雙印連他鄉黨》，該劇以陜西農村優秀共產黨員郭秀明的事跡為素材創作。他在劇中飾演男二號村中長輩梁生茂，并憑此獲得陜西省第四屆藝術節表演一等獎。
2006年，楊新鳴和石國慶、郭達合作，主演四十集情景喜劇《西安虎家》，該劇由英達執導，圍繞聚居在一起的兄弟鄰居家庭展開。2007年，楊新鳴主演了由丁黑執導的劇情電影《阿妹的諾言》，在劇中飾演熱心助人的面館王老板，并憑借該片獲得第27屆金雞獎最佳男配角提名。同年，他還主演了根據李君紀實小說《關中盜墓賊》改編的25集警匪劇《墓道》。
2009年4月，楊新鳴和徐崢、黃渤等人合作，參演由寧浩執導的懸疑電影《無人區》，在片中飾演加油站的老板。該片于2013年12月3日上映，首日票房2200萬人民幣，首周突破1.4億人民幣，楊新鳴憑借該片在影壇嶄露頭角。2010年，楊新鳴和喬振宇、李博合作，主演了由付小健、趙北光執導的劇情電影《鼓王》。楊新鳴在片中飾演彭書記，并于同年6月22日出席影片首映式。
2011年，楊新鳴參演歷史題材電視劇《大秦帝國之縱橫》，在劇中飾演思想家惠施。該劇講述了商鞅變法后日趨強大的秦國惠文王時期的故事，于2013年9月5日在央視播出。同年9月，他參演了由強小路執導的革命題材電影《三邊紅日》，并于同月21日出席影片開機儀式暨新聞發布會 。11月7日，楊新鳴出席劇情數字電影《小鎮大法官》在江蘇省新沂市法院舉行的開機儀式，并在該片中飾演樊遠平庭長，該片獲得江蘇省電影政府獎優秀故事片獎。
2012年9月，楊新鳴出演了由以河南省消防官兵為原型的30集消防勵志劇《兵王》，該劇改編自李昆創作的同名長篇小說。同年12月9日，該劇正式殺青，并于2014年11月18日首播。12月，出演抗戰題材電視劇《戰長沙》，該劇改編自卻卻的同名小說，楊新鳴在劇中飾演胡長寧，該劇播出后成為豆瓣電影2014年度榜單評分最高的中國內地電視劇。
2013年，楊新鳴和馮遠征合作，出演了由劉惠寧執導的38集家庭倫理劇《我的父親母親的婚姻》，在劇中飾演陳同古。同年和朱之文合作，參演了抗戰題材電視連續劇《長城紅》，該劇以唐山市豐潤縣潘家峪慘案為原型，楊新鳴在劇中飾演栓子的師傅七爺。
2014年，楊新鳴參演武俠電視劇《神風刀》，和秦俊杰、徐璽涵合作，飾演男主角水哥的父親。10月6日，他參演的抗戰題材電視劇《北平無戰事》首播，該劇改編自劉和平同名小說，由孔笙、李雪執導，獲得“白玉蘭獎”最佳中國電視劇獎。同年，他還參演了由劉惠寧執導，鄧超主演的愛情電視劇《相愛十年》。
2015年10月，出演由王大治自編、自導、自演的喜劇電影《非常同伙》，該片于同月7日在陜西省西安市太白山景區開機。11月19日，楊新鳴參演的喜劇電影《惡棍天使》曝光了他的角色海報，他在劇中飾演討債的老丁。該片由鄧超自導自演。同月26日，由孔笙、孫墨龍執導，高滿堂編劇，郭濤、袁詠儀等人主演的倫理劇《溫州兩家人》播出，楊新鳴在劇中飾演唐元彪。12月，出演金姝慧執導，李光潔、張睿、倪大紅等人主演的紅色剿匪劇《林海雪原》，該片改編自同名小說，楊新鳴在劇中飾演轉角梁。21日，楊新鳴出席喜劇電影《惡棍天使》在北京舉行的首映發布會，該片同月24日在中國內地上映。
2016年4月26日，楊新鳴和靳東、陳喬恩等出席網絡自制劇《鬼吹燈之精絕古城》的開機發布會，他在劇中飾演考古小分隊成員陳教授。6月，再度和靳東合作，搭檔靳東、白百何等，出演由正午陽光影業出品的都市行業劇《外科風云》，在劇中飾演急診科主任鐘西北。
2017年4月17日，楊新鳴參演的電視劇《外科風云》播出。2018年7月，參演電影《我不是藥神》上映，在片中飾演劉牧師。為拍攝該片，他特意學習了英語；10月23日，參演由陳哲遠、李墨之主演的古裝女性勵志劇《鳳唳九天》開機。
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