少年時期
1981年，5歲的陸毅在幼兒園是文藝積極分子，剛好電影《泉水叮咚》劇組來幼兒園挑兒童演員，他被挑中在片中跑龍套；隨后，他加入上海電視臺小熒星藝術團，并陸續參演了多部影視劇。
1988年，出演電影《荒雪》。1990年，14歲的陸毅被特招進入上海兒童藝術劇院，又經過三年的京劇武打訓練、參與了700多場次的舞臺劇演出。
1993年，在劇情片《第一誘惑》中飾演小浩；同年，陸毅從上海戲曲學校兒童劇演員班畢業，被分配到了上海兒藝。
1995年，與梅婷合作主演了二戰題材反法西斯電視劇《血色童心》，他在劇中飾演中共烈士的遺孤謝廖沙，該劇在二十年后紀念世界反法西斯戰爭勝利70周年之際，獲得俄羅斯總統普京簽發的“偉大衛國戰爭勝利70周年紀念獎章”；隨后，陸毅同時報考了上海戲劇學院和北京電影學院，本來已經以第一名的成績被北京電影學院錄取，但父母希望他在身邊，于是他選擇了上戲。
青澀出道
1998年，還沒大學畢業的陸毅拍攝了由趙寶剛執導的改編自海巖創作的同名小說的電視劇《永不瞑目》，他在劇中飾演陽光帥氣為緝毒甘當臥底的法律系大學生肖童，該劇于次年3月首播，他憑借該劇獲得首屆中國金鷹電視藝術節觀眾最喜愛演員及第18屆中國電視金鷹獎最佳男主角。
1999年，陸毅帶著他的畢業作品《家》和小劇場話劇《莊周戲妻》進京演出，隨后，陸毅開始在影視領域嶄露頭角。
中乾龍德
2000年，陸毅簽約中乾龍德；同年，他主演的愛情偶像劇《夏日戀語錄》播出，其在劇中飾演青年設計師班軍。
2001年2月17日，陸毅與陳坤、羅海瓊、周迅等聯袂主演的年代愛情劇《像霧像雨又像風》首播，他在劇中飾演從英國留學回來的博士李英奇。
2001年，他與范冰冰、任泉、釋小龍合作主演的古裝劇《少年包青天Ⅱ》播出，其在劇中飾演秉公執法、剛正不阿的包拯。
2002年1月，與梅婷、王靈、佟大為合作主演了青春偶像劇《海洋館的約會》，他在劇中飾演海洋館的白馬王子杜偉；隨后，他首次登上中央電視臺春節聯歡晚會的舞臺，與周迅合唱歌曲《今年如此精彩》；5月1日，陸毅領銜主演的愛情偶像劇《一網情深》在央視八套播出，他在劇中飾演單純而樸素的網絡精英陶侃；隨后，由其主演的青春勵志劇《壯志雄心》開播，其在劇中飾演足壇新星歐力，并為該劇配唱主題曲《壯志雄心》，憑借該劇獲得年度中央電視臺電視劇十佳男演員；8月，與袁立、孫紅雷共同主演的懸疑劇《浮華背后》播出，他在劇中飾演冷峻深沉的羅亮；同年，陸毅還與范冰冰合作主演了愛情片《一見鐘情》，其在片中飾演優秀的外企白領老布，隨后他憑借該片提名第25屆大眾電影百花獎最佳男主角獎。
2003年4月，與林心如合作主演都市情感時裝勵志劇《男才女貌》，他在劇中飾演年輕英俊的CEO邱石，該劇播出后收視率在同時段央視電視劇節目中取得排名第一的成績；隨后，客串的都市輕喜劇《粉紅女郎》播出，其在劇中飾演臺灣漫畫家白玉堂；6月，陸毅發布第一張音樂專輯《非同尋常》，他憑借該專輯獲得第五屆CCTV-MTV音樂盛典內地年度最佳男歌手，而專輯也獲得第六屆CCTV-MTV音樂盛典最佳專輯獎，此外，主打歌曲《非同尋常》還獲得MusicIN中國TOP排行榜年度金曲獎。
2004年4月，他與鮑蕾、任泉、李冰冰共同主演年代情感劇《花樣的年華》，其在劇中飾演處心積慮、耍盡陰謀的黑社會老大周子皓；10月，與章子怡、陳沖、姜文合作出演由侯詠執導的劇情片《茉莉花開》，他在片中飾演水泥廠工人鄒杰。
2005年1月，與賈靜雯、喬振宇等聯袂主演了現代言情偶像劇《向左走，向右走》，他在劇中飾演儒雅體貼、才華橫溢的小提琴手沈世濤；2月，其主演的愛情文藝電影《情人結》上映，他在片中飾演深沉內斂又憂郁的侯嘉，隨后，陸毅憑借該片提名第8屆上海國際電影節最佳男演員及第8屆中國長春電影節最佳男主角；3月8日，發行第二張個人音樂專輯《毅猶未盡》，他憑借該專輯獲得第五屆全球華語歌曲排行榜全能藝人，此外，專輯歌曲《左鞋右穿》還獲得年度二十五大金曲獎；7月，與黎明、甄子丹、楊采妮合作主演了動作片《七劍》，他在片中飾演武莊馬夫韓志邦。
2006年1月，與李冰冰、董璇、黃秋生等人共同主演的古裝武俠劇《八大豪俠》播出，他在劇中飾演天下第一殺手平常；8月8日，陸毅領銜主演的青春偶像劇《車神》首播，他在劇中飾演爽朗正直、胸懷豁達的張嘉翔，并憑借該劇獲得南方盛典金南方年度最具人氣男演員。
2008年8月25日，其主演的紅色年代劇《夜幕下的哈爾濱》首播，他在劇中飾演文武雙全的地下共產黨員王一民，隨后，陸毅憑借該劇獲得第3屆BQ紅人榜年度最受歡迎男演員。
華誼兄弟
2009年初，中乾龍德被華誼收購，陸毅作為旗下藝人加盟華誼；4月12日，陸毅主演的青春勵志劇《我的青春誰做主》在央視一套播出，他在劇中飾演昭華房地產總經理周晉。
2010年1月，其主演的古裝歷史劇《大槐樹》播出，他在劇中飾演大智若愚的移民欽差林屹；3月30日，愛情喜劇電影《美麗密令》上映，其在片中飾演外貌英俊、玉樹臨風的總局重案組警司陸志昂；5月，與陳建斌、于和偉、張博等合作主演的古裝歷史劇《三國》播出，而陸毅則在劇中飾演蜀漢丞相諸葛亮；7月，其參演的災難片《唐山大地震》上映，該片最終以6.73億元的成績刷新中國內地電影票房紀錄；8月，首次在銀幕上飾演反派角色，在警匪片《線人》中飾演黑社會老大華天；10月，浪漫愛情電影《跟我的前妻談戀愛》上映，陸毅在片中飾演實心眼的大男孩張琪；11月8日，與張娜拉領銜主演的驚悚懸疑劇《鐵面歌女》播出，他在劇中飾演商界精英白一鳴。
2011年6月，與劉濤合作主演愛情諜戰劇《掩護》，他在劇中飾演忠誠信仰、本分善良的中共特工高志華。
2012年7月，由陸毅領銜主演的歷史戰爭電影《一八九四·甲午大海戰》上映，其在片中飾演北洋水師中軍中營副鄧世昌；9月，由中韓合拍的現代愛情劇《天堂秀》首播，他在劇中飾演聰明敏銳、有責任感的陽光男孩鄺良；10月，他主演的古裝歷史傳記劇《蘇東坡》上星播出，其在劇中飾演北宋文學家、政治家蘇軾，該劇被廣電總局推薦為優秀電視劇；12月，劇情片《新媽媽再愛我一次》上映，他在片中飾演身患疾癥的苦情父親米一凡；此外，他憑借《一八九四·甲午大海戰》及《新媽媽再愛我一次》兩部作品獲得第14屆中國電影表演藝術學會金鳳凰獎學會獎 。
2013年7月，陸毅加盟客串的古裝劇《龍門鏢局》播出，他在劇中飾演兩廣總捕頭成銘章；8月，其主演的愛情劇《假如生活欺騙了你》于多家衛視播出，他在劇中飾演出身貧寒的黎陽，而陸毅憑借該劇獲得BQ紅人榜年度突破演員；同年底，他與華誼約滿。
星河文化
2014年初，陸毅簽約星河文化（前身為拾捌文化）；3月21日，其主演的動作片《英雄之戰》上映，他在片中飾演抗戰勇士獨龍，并為該片配唱主題曲《英雄之戰》；4月6日，與許晴、邵峰、殷桃等聯袂主演的民國愛情劇《皇糧胡同19號》在CCTV8首播，他在劇中飾演霍夫洋行的貨運經理譚明旺；隨后，由他領銜主演的古裝宮廷劇《宮鎖連城》在湖南衛視播出，其在劇中飾演成熟穩重、風流倜儻的富察?恒泰，同時，他還為該劇配唱插曲《愛的供養》，而此劇在播出后則以平均收視率百分之2.80，市場份額百分之8.62的成績取得全國同時段電視劇收視第一；6月，他還與女兒陸雨萱一同參加親子戶外真人秀節目《爸爸去哪兒第二季》。
2015年1月29日，其主演的青春勵志劇《長大》上星播出，他在 劇中飾演性格冷淡的外科導師周明；2月18日，陸毅攜妻子鮑蕾、女兒陸雨萱一共登上央視春晚的舞臺，并表演歌曲《幸福家家有》；隨后，親子互動真人秀電影《爸爸去哪兒2》上映，他還為該片配唱主題曲《爸爸去哪兒》及插曲《么么噠》；4月，攜妻子鮑蕾作為常駐嘉賓加盟夫妻真人秀節目《為她而戰》；9月，其領銜主演的古裝宮廷傳奇劇《大漢情緣之云中歌》上星播出，他在劇中飾演漢昭帝劉弗陵，并為該劇配唱片尾曲《云天外》，而該劇的最終網絡總播放量則突破了80億次；隨后，陸毅加盟中韓競技運動類節目《中韓夢之隊》，并擔任中國隊隊長；11月，由他主演的古裝武俠《秦時明月》播出，其在劇中飾演外表冷漠、內心俠骨柔腸的秦國第一劍圣蓋聶，并憑借該劇提名第19屆華鼎獎中國百強電視劇之中國古裝題材電視劇最佳男演員。同年在懸疑網劇《暗黑者2》客串“網吧老板”。
2016年4月13日，都市情感劇《致單身男女》首播，他在劇中飾 演性格內斂沉穩、年輕有為的建筑師方啟宏；4月3日，作為明星終結者隊隊員參加競技體育綜藝節目《來吧冠軍》；隨后，拍攝都市情感劇《盲約》，其在劇中飾演高冷文化電臺主編楊碩；6月，加盟明星旅行紀實真人秀節目《花樣男團》；9月，其主演的諜戰劇《胭脂》播出，他在劇中飾演擅于揣摩別人心意和動機的中共特工周宇浩；11月，拍攝都市情感劇《只為那一刻與你相見》；同年，他還客串愛情故事片《北京遇上西雅圖之不二情書》，在片中飾演賭客鄭義。
2017年3月28日，由其領銜主演的當代檢察反腐題材劇《人民的名義》在湖南衛視播出，他在劇中飾演嫉惡如仇、勇敢無畏的反貪局長侯亮平，該劇播出后CSM52城市網單集收視率破8，多處次突破記錄，而陸毅亦憑借該劇獲得第22屆華鼎獎中國近現代題材電視劇最佳男演員。10月24日，宣布擔任諜戰劇《天衣無縫》的特邀領銜主演，在劇中扮演為了信仰不惜一切代價的資歷群。2018年4月14日，陸毅搭檔袁泉出演電視劇《風再起時》，飾演的主人公“方邦彥”積極投身國家經濟建設的人物，不止在商海浮沉、還承受著時代變遷造成的傷痛。
2019年7月，在《永不瞑目》播出后的20年，陸毅再度出演禁毒題材電視劇《獵梟》。9月10日，與郭采潔、炎亞綸等合作主演的都市美食輕喜劇《親·愛的味道》首播，陸毅在劇中飾演世界名廚安文宇。
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