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2013年，祝緒丹在中央電視臺普法欄目劇《臥底前傳之姐妹篇》中首次亮相，飾演了鄉村女孩小美一角，從而正式開始自己的演藝生涯；10月，她在網絡喜劇《屌絲男士3》中客串內衣店女店員；12月，主演古裝音樂微電影《龍潭夢》，并飾演穿越千年的畫中人。

2014年4月起，與周鐵男等合作主演了“咖啡短劇”系列劇情微電影，其中《晚安陌生人》、《愛神之夜》獲第二屆亞洲微電影藝術節“金海棠”獎；隨后，她還參演了驚悚網絡劇《靈魂擺渡2》，飾演少女小魚；12月，參與拍攝都市情感網絡劇《心碎急診室》，飾演李欣瑤；同年12月起，拍攝古裝戰爭電視劇《英雄訣》，飾演章犀犀；同年，她還參加了湖南娛樂頻道主辦的星姐選舉并獲得亞軍。

2016年1月8日，祝緒丹作為單元劇女主角出演了民國懸疑電視劇《煮婦神探》，并在“月份牌案件”中飾演了善良單純、極具正義感的月份牌女郎秋水；2月21日，與劉愷威、鄭爽合作出演的清裝宮廷愛情劇《寂寞空庭春欲晚》播出，祝緒丹在劇中飾演俏皮可愛的端敏公主。

2017年1月30日，與楊冪、趙又廷合作主演的古裝玄幻劇《三生三世十里桃花》首播，她在劇中飾演了白淺的表親玄女，該劇則以雙臺平均破一的成績取得了全國同時段電視劇收視冠軍，其全網播放量在播出期間便接近了300億次，祝緒丹個人也因此得到了更多觀眾的認可；4月12日，她領銜主演的改編自九夜茴青春三部曲之一的《初戀愛》開機拍攝，祝緒丹在劇中飾演美麗、善良、執著的溫靜；4月18日，其主演的青春偶像劇《囧女翻身之嗨如花》在優酷視頻播出，她在劇中飾演自帶笑點、萌點、爆點的“奇葩推銷員”魯如花；隨后，祝緒丹還主演了玄幻懸疑網劇《畫心師》，并在劇中飾演了外冷內熱的畫心師岑歡。

2018年2月，祝緒丹出演的都市時尚劇《談判官》在湖南衛視黃金檔播出，她在劇中飾演職場小白兔商碧晨；6月25日，與迪麗熱巴、鄧倫主演都市愛情劇《一千零一夜》首播，她在劇中飾演了優雅迷人的花藝師周心妍；隨后，她還搭檔阮經天、王天辰等主演年代傳奇情感劇《一身孤注擲溫柔》，并在劇中飾演顧婉凝。

2019年1月17日，祝緒丹與侯明昊主演的懸疑探案劇《心宅獵人》開機拍攝，她在劇中飾演了有著雙重人格、天真而又傲嬌的大小姐元慕青；2月27日，與曾舜晞、陳鈺琪領銜主演的古裝武俠劇《倚天屠龍記》在騰訊視頻播出，起在劇中飾演美麗靈秀、淡雅脫俗，卻因愛生恨的峨眉派第四代掌門人周芷若。10月10日，加盟國內首檔導演選角真人秀《演員請就位》；10月12日，參加青春體娛跨界類型節目《超新星全運會第二季》。